脊髓灰質(zhì)炎是由脊髓灰質(zhì)炎病毒引起的一種急性傳染病。該疾病主要通過(guò)疫苗進(jìn)行預(yù)防，相關(guān)疫苗主要有兩種：利用野生脊髓灰質(zhì)炎病毒株生產(chǎn)的滅活疫苗（IPV）和利用減毒的脊髓灰質(zhì)炎病毒株制備的口服減毒活疫苗（OPV）。IPV的優(yōu)點(diǎn)是便于保存和運(yùn)輸，副作用??；OPV的優(yōu)點(diǎn)是接種方便，接種量小，可引起機(jī)體的繼發(fā)性免疫，免疫效果好。

  為了全面消滅脊髓灰質(zhì)炎，2013年世界衛(wèi)生組織（WHO）通過(guò)《全球消滅脊髓灰質(zhì)炎最后階段戰(zhàn)略規(guī)劃（2013—2018）》，要求使用OPV的國(guó)家于2015年10月以后在常規(guī)免疫程序中引入至少一劑IPV，并逐步全部替換為IPV。2015年1月，原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局批準(zhǔn)了具有我國(guó)完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的全球首個(gè)Sabin株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗埃必維（Sabin-IPV）的上市申請(qǐng)。該疫苗由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所（以下簡(jiǎn)稱醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所）研發(fā)，打破了當(dāng)時(shí)我國(guó)沒(méi)有國(guó)產(chǎn)IPV的現(xiàn)狀，它的上市對(duì)我國(guó)徹底消滅脊髓灰質(zhì)炎發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所成立于1958年8月，主要任務(wù)是研制、生產(chǎn)脊髓灰質(zhì)炎疫苗，我國(guó)第一粒脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗糖丸（OPV）就誕生于此。然而，使脊髓灰質(zhì)炎糖丸疫苗脫胎換骨成為免疫效果更佳、安全性更高的注射用IPV并非一日之功。

數(shù)十年技術(shù)沉淀造就埃必維

  早在1983年，醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所的科研人員就開(kāi)始進(jìn)行脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗的研究。為了避免野生病毒株帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)，科研人員決定采用生產(chǎn)減毒活疫苗的Sabin株制備滅活疫苗。然而，由于在制備Sabin株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗時(shí)，使用的甲醛滅活劑導(dǎo)致Sabin病毒的保護(hù)性抗原不穩(wěn)定，因此產(chǎn)生的滅活疫苗免疫原性不及野生型脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活疫苗。解決上述問(wèn)題的一個(gè)重要方法是增加抗原數(shù)量。但是，相對(duì)于野生型病毒，Sabin株產(chǎn)量本來(lái)就很低，如果采用傳統(tǒng)的病毒培養(yǎng)方法勢(shì)必要擴(kuò)大生產(chǎn)規(guī)模，而生產(chǎn)規(guī)模的擴(kuò)大將大大增加疫苗生產(chǎn)成本，影響IPV的普及。因此，需要優(yōu)化Sabin株的培養(yǎng)方法以提高病毒的產(chǎn)量，進(jìn)而獲得足夠的抗原達(dá)到有效誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的水平。

  經(jīng)過(guò)20多年的努力，該研究所于2004年9月提交兩項(xiàng)發(fā)明專利申請(qǐng)，分別涉及減毒株脊髓灰質(zhì)炎疫苗的培養(yǎng)方法和減毒株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗后處理方法，為滅活疫苗的制備奠定了基礎(chǔ)。

  2008年，該研究所開(kāi)展了Sabin株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗的Ⅰ期臨床試驗(yàn)，結(jié)果顯示，與安慰劑對(duì)比，施用高、中、低劑量的人群中沒(méi)有出現(xiàn)嚴(yán)重副反應(yīng)；2009—2010年，開(kāi)展Ⅱ期臨床試驗(yàn)，結(jié)果顯示，與OPV和野生株I PV對(duì)比，施用高、中、低劑量Sabin株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗的人群中沒(méi)有出現(xiàn)嚴(yán)重副反應(yīng)；2012—2014年開(kāi)展了Ⅲ期臨床試驗(yàn)，結(jié)果顯示，與野生株I PV相比，Sabin株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗的免疫效果相似。

  基于良好的臨床效果，“十二五”期間，醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所開(kāi)發(fā)的Sabin株滅活疫苗得到了國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃和國(guó)家重大新藥創(chuàng)制科技重大專項(xiàng)的支持，并成功通過(guò)審評(píng)完成上市，成為全球首個(gè)獲批的Sabin株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗，為我國(guó)IPV接種計(jì)劃的順利實(shí)施提供了保障。

全面布局方法專利 構(gòu)建專利叢林

  醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所圍繞Sabin-IPV的生產(chǎn)工藝提交了一系列發(fā)明專利申請(qǐng)，對(duì)生產(chǎn)工藝進(jìn)行全面保護(hù)。其中，包括利用Vero細(xì)胞高密度發(fā)酵脊髓灰質(zhì)炎減毒株病毒(Ⅰ、Ⅱ型Sabin株和Ⅲ型Pfizer株)，通過(guò)三級(jí)放大細(xì)胞培養(yǎng)和微載體培養(yǎng)技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了大規(guī)模制備細(xì)胞及病毒液的生產(chǎn)技術(shù)；以及利用三級(jí)濾柱過(guò)濾、澄清，超濾濃縮，柱層析純化及滅活等后處理工藝，將病毒液制備成純度高、免疫原性及安全性好、質(zhì)量穩(wěn)定的合格疫苗半成品，從而滿足減毒株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗生產(chǎn)需要的純化技術(shù)。這兩項(xiàng)專利申請(qǐng)，為毒株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗的制備奠定了重要基礎(chǔ)。醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所還圍繞利用人胚肺二倍體細(xì)胞培養(yǎng)脊髓灰質(zhì)炎病毒技術(shù)提交了專利申請(qǐng)，該技術(shù)可以進(jìn)一步提高病毒液產(chǎn)量。此外，還提交了聯(lián)合疫苗專利申請(qǐng)，涉及Sabin株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗與白喉類毒素、破傷風(fēng)類毒素、百日咳毒素的聯(lián)合疫苗；提交了涉及滅活疫苗有效性評(píng)價(jià)的專利申請(qǐng)，將豬作為評(píng)價(jià)皮內(nèi)注射脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗有效性的動(dòng)物模型，可研究?jī)?yōu)化抗原用量；提交了涉及滅活疫苗抗原檢測(cè)的專利申請(qǐng)，利用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)測(cè)定脊髓灰質(zhì)炎病毒抗原的方法，可用于滅活疫苗生產(chǎn)中抗原的定性和定量檢測(cè)。

  由于生產(chǎn)Sabin-IPV的毒株屬于已知毒株，因此從產(chǎn)品方面申請(qǐng)專利保護(hù)Sabin株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗，授權(quán)概率較小。因此，醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所以Sabin-IPV的制備方法為突破點(diǎn)，對(duì)Sabin株病毒的培養(yǎng)方法、純化和滅活方法、安全性和免疫原性評(píng)價(jià)方法、抗原檢測(cè)方法等技術(shù)進(jìn)行了全方位專利布局。雖然不能直接保護(hù)疫苗產(chǎn)品，但可以從一定程度上提高競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品的進(jìn)入門檻。

找準(zhǔn)技術(shù)改進(jìn)方向 助力產(chǎn)品升級(jí)

  對(duì)相關(guān)專利進(jìn)行梳理可以發(fā)現(xiàn)，醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所已經(jīng)找準(zhǔn)了技術(shù)改進(jìn)方向，也明確了IPV疫苗生產(chǎn)中亟待解決的技術(shù)問(wèn)題，即如何提高抗原量以達(dá)到有效誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的水平。

  該研究所提出利用微載體發(fā)酵方法培養(yǎng)Ver o細(xì)胞，并將收獲的細(xì)胞用于培養(yǎng)脊髓灰質(zhì)炎減毒株病毒（Sabin株），通過(guò)對(duì)培養(yǎng)步驟、培養(yǎng)條件、接種比例等具體參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，提高病毒產(chǎn)量，滿足了后續(xù)制備疫苗的抗原需求，促進(jìn)了國(guó)產(chǎn)IPV的研發(fā)。埃必維的上市改寫了我國(guó)不能生產(chǎn)IPV的歷史。

  對(duì)于疫苗產(chǎn)品來(lái)說(shuō)，如果其使用的抗原成分是已公開(kāi)的，可以嘗試從制備方法，如病原體的培養(yǎng)、純化、滅活、檢測(cè)等方面進(jìn)行專利布局。另外，還可以嘗試從改變疫苗產(chǎn)品的輔料、佐劑等方面入手，通過(guò)改進(jìn)疫苗的組成來(lái)對(duì)疫苗產(chǎn)品進(jìn)行更直接的保護(hù)。

  醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所對(duì)Sabin株滅活疫苗的開(kāi)發(fā)，適應(yīng)了國(guó)家IPV的戰(zhàn)略需求，研發(fā)過(guò)程獲得一系列政策支持，產(chǎn)品上市進(jìn)程加快。另外，對(duì)于疫苗生產(chǎn)技術(shù)，該研究所盡早布局、未雨綢繆，在臨床試驗(yàn)之前就進(jìn)行了專利布局，形成了一套擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的制備方法。對(duì)研發(fā)主體來(lái)說(shuō)，根據(jù)自身特點(diǎn)對(duì)已知方法進(jìn)行改進(jìn)，從而提高產(chǎn)品的生產(chǎn)效率或者降低生產(chǎn)成本等，也是一種行之有效的研發(fā)思路。（作者單位：國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局專利局專利審查協(xié)作北京中心）